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AML-12 小鼠正常肝細胞：特性、應用與研究價值

一、細胞特性與生物學背景

1. 起源與永生化
   AML-12 細胞來源于 C57BL/6J 小鼠的正常肝細胞，通過轉染 SV40 病毒大 T 抗原實現(xiàn)永生化，保留了肝細胞的典型形態(tài)和功能特征，如上皮樣貼壁生長、多邊形細胞形態(tài)及清晰的細胞間連接。
2. 功能特征
   • 代謝能力：表達多種肝臟特異性酶，如細胞色素 P450 家族（CYP1A2、CYP2B10、CYP3A11 等）、尿苷二磷酸葡萄糖醛酸轉移酶（UGT）和谷胱甘肽 S - 轉移酶（GST），可模擬肝細胞的藥物代謝和**功能。
   • 合成能力：能合成白蛋白（Albumin）、轉鐵蛋白（Transferrin）等肝臟特異性蛋白，維持正常肝細胞的分泌功能。
   • 信號通路：保留肝細胞膜表面受體（如胰島素受體、低密度脂蛋白受體）及相關信號通路，適用于代謝調(diào)控機制研究。
3. 核型與穩(wěn)定性
   該細胞系核型接近正常小鼠肝細胞（2n=40），在常規(guī)培養(yǎng)條件下可穩(wěn)定傳代 50 代以上，且功能特性無顯著衰減，適合長期實驗需求。

二、培養(yǎng)條件與操作要點

1. 培養(yǎng)基組成
   推薦使用 DMEM 高糖培養(yǎng)基（含 4.5 g/L 葡萄糖），添加 10% 胎牛血清（FBS）、1% 非必需氨基酸（NEAA）、1 mM 丙酮酸鈉、100 U/mL 青霉素 - 鏈霉素，及關鍵生長因子組合（5 μg/L 胰島素、5.5 μg/L 轉鐵蛋白、5 ng/L 硒酸鈉，即 ITS-G）。
2. 培養(yǎng)環(huán)境
   需在 37℃、5% CO?的濕潤培養(yǎng)箱中孵育，貼壁密度達 80%~90% 時進行傳代，消化液推薦使用 0.25% 胰酶 - EDTA，消化時間控制在 2~3 分鐘，避免過度消化損傷細胞。
3. 質(zhì)量控制
   • 支原體檢測：定期通過 PCR 或熒光染色法檢測，確保無支原體污染。
   • 功能驗證：可通過檢測白蛋白分泌水平或 CYP 酶活性，驗證細胞功能完整性。

三、應用場景與研究進展

1. 肝臟疾病建模
   • 非酒精性脂肪肝（NAFLD）：通過高脂培養(yǎng)基或棕櫚酸誘導脂質(zhì)堆積，模擬肝細胞脂肪變性，研究 PPARγ、AMPK 等信號通路在脂肪代謝中的作用。
   • 肝損傷與修復：利用 CCl?、APAP（對乙酰氨基酚）等肝毒素誘導氧化應激模型，探討 Nrf2、NF-κB 等通路在肝損傷中的調(diào)控機制。
2. 藥物代謝與毒性評估
   • 代謝酶誘導 / 抑制：通過檢測 CYP 酶活性變化，評估藥物（如利福平、酮康唑）對肝臟代謝功能的影響，助力藥物相互作用研究。
   • 肝毒性篩選：對比 AML-12 細胞與肝癌細胞系（如 HepG2）的毒性反應，篩選潛在肝毒性化合物，降低臨床前研究風險。
3. 代謝調(diào)控機制研究
   • 糖脂代謝：通過胰島素刺激實驗，研究 PI3K/Akt 通路對葡萄糖攝取和糖原合成的調(diào)控，或通過油酸處理探討脂質(zhì)合成與 β- 氧化的平衡。
   • 膽汁酸代謝：利用法尼醇 X 受體（FXR）激動劑 / 拮抗劑，分析膽汁酸合成關鍵酶（如 CYP7A1）的表達變化。
4. 新型療法開發(fā)
   • 基因編輯：通過 CRISPR-Cas9 系統(tǒng)敲除 / 過表達特定基因（如 PNPLA3、TM6SF2），研究遺傳性肝病的發(fā)病機制。
   • 納米藥物遞送：利用 AML-12 細胞評估肝靶向納米載體的攝取效率及毒性，優(yōu)化藥物遞送系統(tǒng)設計。

四、局限性與替代模型