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D11E8A1G5小鼠雜交瘤細胞
貨號：BY-1196
品牌：其它品牌
規格：T25瓶
目錄價：詢價
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D11E8A1G5 小鼠雜交瘤細胞

一、命名規則與細胞來源解析

雜交瘤細胞的命名通常隱含 實驗室編號、融合批次、篩選孔位及亞克隆信息，以 “D11E8A1G5” 為例：

  • 前綴 D11：可能代表某實驗室第 11 批融合實驗（“D” 或為自定義編號，如實驗室代號首字母）。
  • 中間 E8A1：對應 96 孔板的篩選路徑（如 E8 孔為初次克隆孔，A1 為亞克隆孔位）。例如：
    • 原始克隆從 E8 孔篩選獲得，經有限稀釋后在 A1 孔中形成單細胞克隆。
  • 后綴 G5：可能為 亞克隆代次或特定標記（如第 5 次亞克隆獲得的 G 系列細胞），用于區分同一原始克隆的不同單細胞衍生株。
  • 關聯性：與同系列克隆（如 D11E8A1G1–G4）可能源自 同一融合事件，共享相同的骨髓瘤親本（如 SP2/0 或 NS0 細胞）和免疫原（如蛋白、多肽或小分子半抗原），但亞克隆間可能因 遺傳漂變 導致抗體分泌穩定性或親和力差異。

二、細胞生物學特性預測

1. 基礎生物學屬性

  • 細胞形態：典型雜交瘤細胞呈 圓形懸浮生長，直徑約 10–15 μm，密度較高時可見細胞聚團，傳代后 24 小時內恢復單細胞狀態。
  • 生長動力學：
    • 對數生長期細胞倍增時間約 18–22 小時，*大活細胞密度可達 1×10? cells/mL（含 10% FBS 的 RPMI 1640 培養基）。
    • 對營養耗竭敏感，當葡萄糖濃度＜1 g/L 或谷氨酰胺＜0.5 mM 時，活率顯著下降。
  • 抗體分泌特性：
    • 分泌單克隆抗體，類型可能為 IgG、IgM 或 IgA（需通過 亞型鑒定試劑盒 驗證），理論上每個亞克隆僅分泌一種輕鏈（κ 或 λ）和重鏈組合。

2. 培養條件優化建議

培養階段 推薦培養基配方 關鍵操作參數
常規傳代 RPMI 1640 + 10% FBS + 1% 雙抗 傳代密度：3×10?–5×10? cells/mL，分瓶比例 1:3
篩選階段 RPMI 1640 + 10% FBS + HAT 培養基 HAT 維持 2 周，隨后過渡至 HT 培養基
無血清適應 CD Hybridoma 培養基 + 5% FBS→逐步降為 0% 每 3 代降低 2% FBS，監測活率≥90% 且抗體滴度穩定
凍存保存 90% FBS + 10% DMSO（或 CryoStor CS10） 程序降溫：4℃ 30min → -20℃ 1h → -80℃過夜 → 液氮

注意：若細胞貼壁性增強，可能提示 支原體污染 或培養基成分異常，需立即用 PCR 法檢測污染并更換新鮮培養基。

三、功能驗證與應用方向

1. 抗體靶點與特異性鑒定

  • 抗原識別實驗設計：
    • 免疫沉淀 - 質譜（IP-MS）：用 Protein A/G 磁珠捕獲抗體 - 抗原復合物，經 SDS-PAGE 分離后切膠送質譜，鑒定潛在抗原（需設置 IgG 同型對照排除非特異性結合）。
    • 流式細胞術（FACS）：若推測抗體靶向細胞表面抗原，可標記熒光二抗后分析陽性細胞比例（如腫瘤細胞系 A375、HEK293T 等）。
  • 交叉反應性檢測：
    • 通過 ELISA 矩陣實驗 評估抗體與同源抗原（免疫原）及異源抗原（如同源蛋白家族成員）的結合活性，計算交叉反應率（如≤5% 視為高特異性）。

2. 潛在應用場景

應用方向 典型實驗設計 評價指標
診斷試劑開發 構建雙抗夾心 ELISA 試劑盒（D11E8A1G5 作為捕獲抗體） 檢測限（LOD）≤0.1 ng/mL，線性范圍 1–100 ng/mL
中和抗體研究 抗體與細胞因子預孵育后處理炎癥模型細胞（如 LPS 刺激的 RAW264.7） IL-6 分泌量抑制率≥70%（ELISA 檢測）
抗體藥物綴合物（ADC） 抗體與化療藥物（如 MMAE）通過交聯劑偶聯，評估對靶細胞毒性 IC??≤10 nM（MTT 法檢測腫瘤細胞存活率）
基礎研究工具 作為熒光標記抗體用于免疫熒光（IF）或免疫組化（IHC） 特異性熒光信號強度 / 背景比值≥3:1

3. 亞克隆性能對比

若存在同系列亞克隆（如 G1–G5），建議開展橫向比較：

  • 抗體滴度：收集培養 72 小時的上清，通過 ELISA 測定濃度（如 G5 滴度為 15 μg/mL，顯著高于 G1 的 8 μg/mL，則優先選擇 G5）。
  • 親和力常數（KD）：使用 Biacore 或 Octet 測定，KD 值越低（如＜10?? M）表明親和力越強。
  • 遺傳穩定性：通過 短串聯重復序列（STR）分析 對比各亞克隆的基因指紋，確保 G5 與原始克隆的匹配度≥95%。

四、關鍵實驗驗證流程

1. 細胞株鑒定與質量控制

  • STR 圖譜分析：委托專業機構檢測細胞 STR 位點（如 ATCC 標準的 8 個位點），與已知雜交瘤細胞數據庫比對，排除交叉污染。
  • 支原體檢測：每周用 Lonza MycoAlert 試劑盒 檢測，熒光定量 PCR 法靈敏度可達 10 CFU/mL，陽性樣本需用 Mynocycline 處理或丟棄。
  • 抗體亞型鑒定：使用 Sigma-Aldrich 抗體亞型檢測試劑盒，通過斑點雜交法確定重鏈（IgG1–IgG4、IgM 等）和輕鏈類型。

2. 生產工藝開發要點

  • 批次培養優化：
    • 在 3L 攪拌式生物反應器中測試 pH 7.0 vs. 7.2、溶氧（DO）30% vs. 50% 對細胞活率和抗體產量的影響，目標活率維持＞90% 超過 5 天。
    • 添加 谷氨酰胺替代物（如 GlutaMAX） 減少氨積累，使氨濃度＜5 mM（離子色譜法檢測）。
  • 純化工藝設計：
    • 采用 Protein A 層析柱（如 MabSelect SuRe）捕獲抗體，結合 陰離子交換層析（Q Sepharose）去除 DNA（≤10 pg/μg 抗體）和宿主蛋白（HCP≤100 ppm）。

五、注意事項與資源整合

  1. 實驗記錄標準化：
    • 詳細記錄細胞來源（如融合用小鼠品系為 BALB/c 或 C57BL/6）、免疫原制備細節（如抗原濃度、佐劑類型）及亞克隆次數（如 G5 為第 3 次亞克隆產物）。
  2. 生物**管理：
    • 若抗體靶向病原體相關抗原（如病毒蛋白），需在 BSL-2 實驗室 操作，廢棄物經高壓滅菌處理。
  3. 數據可追溯性：
    • 保存原始篩選記錄（如 96 孔板 ELISA 結果的 Excel 文件）、細胞凍存管位置數據庫（如液氮罐分區圖），便于后續實驗復現。

總結

D11E8A1G5 小鼠雜交瘤細胞的核心價值在于其分泌抗體的特異性與功能屬性，當前需通過 抗原鑒定 和 功能驗證 明確其生物學用途。建議優先開展 IP-MS 實驗 鎖定抗原靶點，同時完成細胞株穩定性評估（如傳代 30 代后的 STR 檢測）。若用于抗體藥物開發，需進一步開展 動物體內毒性實驗 和 藥代動力學分析。如需更精準的研究方案，可補充免疫原類型、預期應用場景等信息。